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            詳細科普IPS培養基制備全部流程和注意事項
            發布時間:2022-10-21瀏覽:973次
              IPS培養基是用于hPSC維持培養的無飼養層、無動物源成份的培養基。該培養基含有用于hPSC維持培養所需的最基本成份,為多能干細胞培養提供了一種更為簡單的配方,下面我們來詳細看看。
              IPS培養基制備的基本方法和注意事項
              1、IPS培養基配方的選定
              同一種IPS培養基的配方在不同著作中常會有某些差別。因此,除所用的是標準方法,應嚴格按其規定進行配制外,一般均應盡量收集有關資料,加以比較核對,再依據自己的使用目的,加以選用,記錄其來源。
              2、IPS培養基的制備記錄
              每次制備IPS培養基均應有記錄,包括IPS培養基名稱,配方及其來源,和各種成份的牌號,最終pH值、消毒的溫度和時間制備的日期和制備者等,記錄應復制一份,原記錄保存備查,復制記錄隨制好的IPS培養基一同存放、以防發生混亂。
              3、IPS培養基成分的稱取
              IPS培養基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯亂,一次完成,不要中斷??蓪⑴浞街糜诎鴤?,每稱完一種成分即在配方面軍做出記號,并將所需稱取的藥品一次取齊,置于左側,每種稱取完畢后,即移放于右側。*稱取完畢后,還應進行一次檢查。
              4、IPS培養基各成份的混合和溶化
              IPS培養基所用化學藥品均應是化學純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋,以防有微量銅或鐵混入IPS培養基中,使細菌不易生長。使用不銹鋼鍋加熱溶化,可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時、可先用溫水加熱并隨時擾動、以防焦化、如發現有焦化現象、該IPS培養基即不能使用,應重新制備。待大部分固體成分溶化后,再用較小火力使所有成分*溶化,迄至煮沸。如為瓊脂溶化,用另一部分水溶化其它成分,然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過程中,因蒸發而丟失的水分,最后必須加以補足。
              5、IPS培養基pH的初步調正
              因IPS培養基在加熱消毒過程中、pH會有所變化,IPS培養基各成分*溶解后,應進行PH的初步調正。例如,牛肉浸液約可降低pH0.2,而腸浸液pH卻會有顯著的升高。因此,對這個步驟,操作者應隨時注意探索經驗、以期能掌握IPS培養基的最終PH,保證IPS培養基的質量。PH調整后,還應將IPS培養基煮沸數分鐘,以利IPS培養基沉淀物的析出。
              6、IPS培養基的過濾澄清
              液體IPS培養基必須澄清,瓊脂IPS培養基也應透明無顯著沉淀,因此,須要采用過濾或其它澄清方法以達到此項要求。一般液體IPS培養基可用濾紙過濾法,濾紙應折疊成折扇或漏斗形,以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。
              瓊脂IPS培養基可用清潔的白色薄絨布趁熱過濾。亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過濾。新制肉、肝、血和土豆等浸液時、則須先用絨布將碎渣濾去,再用濾紙反復過濾。如過濾法不能達到澄清要求、則須用蛋清澄清法。即將冷卻至55~60°C的IPS培養基放入大的三角燒瓶內,裝入量不得超過燒瓶容量的1/2,每1000mlIPS培養基加入1~2個雞蛋的蛋白,強力振搖3~5分鐘,置高壓蒸汽滅菌器中、121°C加熱20分鐘、取出趁熱以絨布過濾即可。
              7、IPS培養基的分裝
              IPS培養基的分裝,應按使用的目的和要求,分裝于試管、燒瓶等適當容器內。分裝量不得超過容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵,其外還須用防水紙包扎(現試管一般多有用螺旋蓋者)。分裝時能使用半自動或電動的定量分裝器。分裝瓊脂斜面IPS培養基時,分裝量應以能形成2/3底層和1/3斜面的量為洽當。分裝容器應預先清洗干凈并經干烤消毒,以利于IPS培養基的*滅菌。每批IPS培養基應另外分裝20mlIPS培養基于一小玻璃瓶中,隨該批IPS培養基同時滅菌,以為測定該批IPS培養基最終pH之用。
              8、IPS培養基的滅菌
              一般IPS培養基可采用121°C高壓蒸汽滅菌15分鐘的方法。在各種IPS培養基制備方法中,如無特殊規定,即可用此法滅菌。
              某些畏熱成分,如糖類,應另行配成20%或更高的濃液,以過濾或間歇滅菌法消毒,以后再用無菌操作技術、定量加于IPS培養基。明膠IPS培養基亦應用較低溫度滅菌。血液、體液和抗生素等則應以無菌操作技術抽取和加入于經冷卻約50°C左右的IPS培養基中。
              瓊脂斜面IPS培養基應在滅菌后立即取出,冷至55℃-60℃時,擺置成適當斜面,待其自然凝固。
              9、IPS培養基的質量測試
              每批IPS培養基制備好以后,應仔細檢查一遍,如發現破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被IPS培養基沾染等、均應挑出棄去。并測定其最終pH。
              將全部IPS培養基放入36±1°C恒溫箱培養過夜,如發現有菌生長,即棄去。
              用有關的標準菌株接種1~2管或瓶IPS培養基,培養24~48小時,如無菌生長或生長不好。應追查原因并重復接種一次,如結果仍同前,則該批IPS培養基即應棄去,不能使用。
              10、IPS培養基的保存
              IPS培養基應存放于冷暗處,能放于普通冰箱內。放置時間不宜超過一周,傾注的平板IPS培養基不宜超過3天。每批IPS培養基均必須附有該批IPS培養基制備記錄副頁或明顯標簽。
            上海微科生物技術有限公司(www.vnkeers.com)主營:NK培養基,血小板裂解物,IPS培養基 備案號:滬ICP備16042879號-1

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